Gökhan ÇAKIRCA, Osman EELİYAOĞLU, CEMAL POLAT, Fatma Birgül IŞIK, NURİYE METE

Paraoksonaz enzim aktivitesi ölçümünde manuel yöntemin standardizasyonu ve performans değerlendirmesi

Amaç: Geleneksel laboratuvar yöntemleriyle hazırlanan paraoksonaz (PON1) kitinin maliyet açısından çok daha ucuz ve reaktiflerin taze hazırlanmış olması itibariyle de iyi analiz performansı göstereceğini varsayarak otoana lizörde PON1’in standardizasyonu ve performansının de ğerlendirilmesini amaçladık. Yöntemler: Çalışmaya alınan 35 sağlıklı bireyden alı nan venöz kanlardan santrifüj sonrası toplam 100 mL serum havuzu oluşturuldu. Serum havuzundan gün içi değişimleri değerlendirmek için 20 numune, günler arası değişimleri değerlendirmek için 30 numune hazırlanarak PON1 enzim aktiviteleri çalışıldı. Hazırlanan 30 örneğin PON1enzim aktiviteleri hem manuel olarak hazırlanan kit hem de ticari kit ile otoanalizörde çalışılarak yöntem uy gunluğu değerlendirildi. Bulgular: Çalışmamızda paraoksonaz (PON1) enzim aktivitesi için: Ortalama, standart deviasyon (SD), yüzde varyasyon katsayısı (% CV) değerleri; gün içi (72,70 U/L, 0,43, 0,59) ve günler arası (74,24 U/L, 3,00, 4,04) olarak tespit edildi. PON1 enzim aktivite değerlerinin, manuel yöntem ve ticari kit arasındaki korelasyon katsayıları r= 0,92 ve r2= 0,84 bulundu. Sonuç: Manuel hazırlanan reaktiflerle elde edilen so nuçların yeterli analitik performans gösterdikleri görüldü. Ayrıca hazırlamış olduğumuz serum havuzu porsiyonize edildi ve gelecek çalışmalar için laboratuvarımızda inter nal kalite kontrolü yapmak için kısmen standardizasyon gerçekleştirilmiş oldu ve rastgele hasta girişlerinde kont rol serumu olarak okutulmaya başlandı. Buna rağmen, standardize kontrol serumlarının kullanılmasının, rutin laboratuvarlarda daha güvenilir olduğu düşünülmektedir.

Standardization and performance evaluation of manual measurement method for paraoxonase activity

Objectives: We hypothesised that using the traditional laboratory methods for preparing the kit with chemicals may represent sufficient analytic performance with com mercial kits, because of the fresh reagents and cost effec tive. We aimed to apply the paraoxonase (PON1) study procedure to the autoanalyser and evaluate the analytic performance of the study. Methods: Thirty five healthy individuals were included in the study. A total of 100 mL serum pool was created after centrifugation of venous blood samples. To assess the intra-assay variations of PON1 enzyme activities 20 samples and for inter-assay variations 30 samples were prepared from the serum pool and PON1 enzyme activi ties were studied. As well as, 30 samples were studied to evaluate the correlation between the commercial kit and the manual prepared kit from chemicals. Results: In this study, the mean, standard deviation (SD), percent coefficient of variation (% CV) values of PON1 enzyme activities for intra-assay (72.70 U / L, 0.43, 0.59) and inter-assay (74.24 U / L, 3.00, 4.04) were determined. The correlation coefficient between the manual method and the commercial kit were r = 0.92 and r2 = 0.84. Conclusion: The results of manual kit were showed good analytical performance with commercial kit. Therefore, the serum pool which was partially standardized in this study was portionized for using as an internal quality con trol serum for future studies in our laboratory. However, the use of standardized control sera, is considered to be more reliable in routine laboratories.

PDF

___

1. Mackness B, Mackness MI, Durrington PN, et al. Paraox onase: biochemistry, genetics and relationship to plasma lipoproteins. Curr. Opin. Lipidol 1996;7:69-76.
2. Antikainen M, Murtomaki S, Syvanne M, et al. The Gln- Arg191 polymorphism of the human paraoxonase gene (HUMPONA) is not associated with the risk of coronary artery disease in Finns. J Clin Invest 1996;98:883-885.
3. Mackness MI, Durrington PN. HDL, its enzymes and its potential to influence lipid peroxidation. Atherosclerosis 1995;115:243-253.
4. McCord JM. The evolution of free radicals and oxidative stress. Am J Med 2000;108:652-659.
5. Abuja PM, Albertini R. Methods for monitoring oxidative stress, lipid peroxidation and oxidation resistance of lipo proteins. Clin Chim Acta 2001;306:1-17.
6. Durrington PN, Mackness B, Mackness MI. Paraoxonase and Atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2001;21:473-480.
7. Nair SP, Shah NC, Taggarsi A, Nayak U. PONI and its as sociation with oxidative stress in type I and type II diabetes mellitus. Diabetes Metab Syndr 2011;5:126-129.
8. Tanimoto N, Kumon Y, Suehiro T, et al. Serum paraox onase activity decreases in rheumatoid arthritis. Life Sci 2003;72:2877-2885.
9. Amine K, Atouk A, Moussamih S, et al. Paraoxonase-1 (PON1) activity in patients with coronary artery diseases and in diabetic patients. Ann Biol Clin 2011;69:671-617.
10. Eckerson HW, Wyte CM, La Du BN. The human serum paraoxonase/ arylesterase polymorphism. Am J Hum Genet 1983;35:1126-1138.
11. Gülcü F, Gürsu MF. Paraoksonaz ve arilesteraz aktivite öl çümlerinin standardizasyonu. Turk J Biochem 2003;28:45- 49.